QIAGEN Plasmid Kits12123质粒纯化
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QIAGEN Plasmid Kits应用重力流阴离子交换柱纯化转染级质粒DNA。该试剂盒可纯化获得至多10 mg的质粒DNA。离心获得澄清的裂解产物和异丙醇沉淀。
转染效率与质粒纯化方法。
采用不同方法制备pRSVcat DNA,通过脂质体介导的转染将其导入的细胞系内,40小时后测定CAT表达水平,确定转染效率。每个柱形代表4个独立的转录的平均值(2个质粒制备物分别转染2次)。使用QIAGEN Plasmid Kit可获得zui高的转染效率。
QIAGEN Plasmid Kit实验流程。
将中性细菌裂解物直接置于QIAfilter Cartridge内孵育,数秒内即可过滤澄清。然后将澄清的裂解物上样至阴离子交换纯化柱,在适当的低盐和pH条件下,质粒DNA会选择性地结合上去。利用中盐浓度的洗涤液去除RNA、蛋白质、代谢物及其他低分子量杂质,使用高盐缓冲液洗脱超纯的质粒DNA。利用异丙醇沉淀对DNA进行浓缩并脱盐,并通过离心收集。
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